DAPI (1mg/ml) DAPI染液（1mg/ml）

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產(chǎn)品標(biāo)簽

DAPI 藍(lán)色細(xì)胞核探針；PI碘化丙啶；Hoechst 33342；Hoechst 33258；7-AAD；CAS：28718-90-3；

產(chǎn)品信息

溫馨提示：見我司整理的細(xì)胞核（Cell Nuclear）熒光探針產(chǎn)品專題。

溫馨提示：原DAPI（5mg/ml）（MX4208-200UL）取消，請選擇DAPI（1mg/ml）替換使用。

產(chǎn)品描述

DAPI，英文全稱4’,6-Diamidino-2’-phenylindole，中文全稱4’,6-聯(lián)脒-2’-苯基吲哚，是一種藍(lán)色熒光染料，選擇性結(jié)合雙鏈DNA的小溝區(qū)（優(yōu)先結(jié)合AT富集的DNA）形成穩(wěn)定的復(fù)合物，產(chǎn)生比DAPI約強(qiáng)20倍的熒光。DAPI的最大激發(fā)/發(fā)射波長為340/488nm，DAPI-DNA復(fù)合物的最大激發(fā)/發(fā)射波長為364/454nm，通常用作熒光顯微術(shù)、流式細(xì)胞術(shù)和染色體染色的細(xì)胞核復(fù)染劑。由于對DNA的高親和性，DAPI還常常被用在細(xì)胞計數(shù)、凋亡檢測、支原體污染檢測、基于DNA內(nèi)含物的細(xì)胞分選，以及高內(nèi)涵成像分析中的核分割工具。雖然高濃度情況下DAPI能夠進(jìn)入活細(xì)胞，但DAPI不具細(xì)胞膜滲透性，通常情況用來染固定細(xì)胞。對于活細(xì)胞染色，Hoechst 33342（貨號：MX4203-10MG）是一種受歡迎的具細(xì)胞膜滲透性的核復(fù)染劑。

本品是濃度為1mg/ml的DAPI儲存液。使用時根據(jù)實(shí)驗應(yīng)用直接將儲存液用相應(yīng)溶液稀釋到工作濃度即可。推薦工作濃度通常為0.5-10μg/ml，用于固定的細(xì)胞和組織的細(xì)胞核染色。

保存與運(yùn)輸方法

保存：-20℃避光保存，1年有效。

運(yùn)輸：冰袋運(yùn)輸。

注意事項

1）   DAPI對人體有一定刺激性，請注意適當(dāng)防護(hù)。

2）   DAPI儲存液（1mg/ml）置于-20℃避光保存，1年穩(wěn)定。稀釋的工作液（1-5μg/ml），置于+4℃，6個月穩(wěn)定。

3）   熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測。

4）   為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。

5）   為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

1.      工作液配制

用雙蒸水或PBS稀釋母液，配制成所需要的工作濃度（0.5-10μg/ml）。

2.      固定的細(xì)胞或組織染色

對于固定的細(xì)胞或組織樣品，固定后，適當(dāng)洗滌去除固定劑。DAPI染色通常在其他染色的最后進(jìn)行。

如果不需要進(jìn)行其它染色，則直接進(jìn)行DAPI 染色。

2.1于貼壁細(xì)胞或組織切片：加入適量DAPI染色液，覆蓋住樣品即可。

對于懸浮細(xì)胞：至少加入待測染色樣品體積3倍的染色液，混勻。室溫放置3-5min。

2.2 吸除DAPI染色液，用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5min。

2.3 直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。Ex/Em=364/454nm。

常見問題

1、   DAPI是一種好的活細(xì)胞核標(biāo)記探針？

回復(fù)：DAPI被認(rèn)為是一種半滲透性/無滲透性的細(xì)胞核染料。對細(xì)胞核的染色性能好壞依賴于細(xì)胞系類型。某些細(xì)胞系可用DAPI染色，某些完quan不可以，而某些標(biāo)記結(jié)果不一致。替代的話，建議用Hoechst 33342（貨號：MX4204-10ML）或Hoechst 33258（貨號：MX4202-10ML），具有同DAPI一樣的波長和核酸結(jié)合模式，但是有非常好的細(xì)胞膜滲透性。

2、   DAPI和Hoechst染料相當(dāng)類似，如何二選一？

回復(fù)：DAPI是非常通用的藍(lán)色熒光染料，用于細(xì)胞核復(fù)染。對固定和透化的細(xì)胞/組織，具有非常明亮的細(xì)胞核標(biāo)記。然而，此染料被認(rèn)為是半滲透至不滲透的染料，用于活細(xì)胞染色的結(jié)合不一致。Hoechst 33342是一種細(xì)胞膜滲透性的染料，具有同DAPI的結(jié)合機(jī)制和熒光特征。非常適合用于活細(xì)胞成像，效果就如同DAPI用于固定細(xì)胞染色。

3、   有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，行EdU插入的點(diǎn)擊反應(yīng)后再用DAPI染細(xì)胞，比未進(jìn)行點(diǎn)擊反應(yīng)直接用DAPI染色的信號低，是什么原因?qū)е碌模?/span>

回復(fù)：點(diǎn)擊反應(yīng)內(nèi)的銅離子在很少程度上會變性DNA（雖然變性程度沒有BrdU檢測那么多），導(dǎo)致DNA染料（包括DAPI和Hoechst染料）的結(jié)合能力受到影響。這部分影響僅在經(jīng)典的EdU試劑盒內(nèi)表現(xiàn)明顯，而對于第二代的EdU試劑盒（使用相對更低濃度的銅離子）基本無影響。

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