DH5α λpir Chemically Competent Cell

 大腸桿菌化學感受態(tài)細胞

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菌株描述

DH5α λpir菌株來源于DH5α，在DH5α菌株的基因組中引入λpir，使得菌株可以表達PIR蛋白，讓含R6Kg ori復(fù)制子的質(zhì)粒得以正常復(fù)制。DH5α λpir菌株缺失核酸內(nèi)切酶 （endA1），提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量；重組酶缺陷型 （recA1）減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA 的穩(wěn)定性。lacZΔM15的存在使DH5α λpir可用于藍、白斑篩選。

DH5α λpir菌株基因型：

F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) LAMpir U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 

phoA

產(chǎn)品描述

本品是大腸桿菌DH5α λpir菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細胞，可用于DNA的熱擊轉(zhuǎn)化。經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率可達1×109 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。

產(chǎn)品包裝

保存與運輸條件

保存：-80℃保存，六個月有效。

運輸：干冰運輸。

注意事項

1）   感受態(tài)細胞必須用干冰運輸，感受態(tài)細胞應(yīng)在-80℃保存。

2）   感受態(tài)細胞zuihao在冰上融化，不可在冰上放置時間過長，長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。

3）   進行轉(zhuǎn)化操作時，需在相應(yīng)溫度及無菌條件下進行。

4）   為防止轉(zhuǎn)化實驗不成功，可保留部分連接反應(yīng)液以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到zui低。

5）   產(chǎn)品包裝內(nèi)含質(zhì)粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供對照實驗用。

6）   DH5α λpir菌株生長緩慢，在平板上培養(yǎng)或液體搖菌時都要延長菌體生長時間（37℃，18h以上）。

7）   后續(xù)進行陽性菌落的擴繁和高純質(zhì)粒的獲取，推薦選用TB培養(yǎng)基（Terrific Broth），優(yōu)于LB或SOC。

8）   為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在無菌條件的標準下進行】

1）  從-80℃冰箱取出取感受態(tài)細胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物），用手輕彈管底輕輕混勻（避免用槍吸打），冰浴靜置25min。

2）   42℃水浴熱激45s，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2min。此過程不要搖動離心管。

3）   向每個離心管中加700 μl無菌的LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，200 rpm振蕩培養(yǎng)70min，目的使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標記基因表達，使菌體復(fù)蘇。

4）   低速離心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用槍輕輕吹打重懸菌塊，之后加到含所選質(zhì)粒篩選抗生素的LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)過夜（至少18h）。

【注意】：

a）涂布用量可根據(jù)具體實驗調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可不用離心，直接取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；反之，若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少，則通過離心（5000 rpm，1min）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。原則是以在平板上能挑到單克隆菌落為宜。

b）新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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