細胞凋亡雙染試劑盒
簡要描述：
細胞凋亡雙染試劑盒（Hoechst 33342/PI Double Stain Kit）是一種采用Hoechst 33342和碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）雙染進行細胞凋亡與壞死分析的檢測試劑盒。檢測原理在于：Hoechst 33342是一種活細胞核染料，能穿透正常細胞以及凋亡細胞膜，與DNA結(jié)合（很大激發(fā)波長為350nm，發(fā)射波長為461nm
產(chǎn)品時間：2024-03-12
打印當前頁Hoechst 33342/PI Double Stain Kit細胞凋亡雙染試劑盒
產(chǎn)品標簽
Hoechst 33342/PI凋亡檢測試劑盒，JC-1膜電位檢測；Annexin V-FITC/PI凋亡檢測試劑盒；TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒；
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 價格（元） |
Hoechst 33342/PI Double Stain Kit 細胞凋亡雙染試劑盒 | MX3201-100T | 100T | 318 |
產(chǎn)品描述
Hoechst 33342/PI細胞凋亡雙染試劑盒（Hoechst 33342/PI Double Stain Kit）是一種采用Hoechst 33342和碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）雙染進行細胞凋亡與壞死分析的檢測試劑盒。檢測原理在于：Hoechst 33342是一種活細胞核染料，能穿透正常細胞以及凋亡細胞膜，與DNA結(jié)合（很大激發(fā)波長為350nm，發(fā)射波長為461nm），呈現(xiàn)藍色熒光。當細胞發(fā)生凋亡，染色質(zhì)發(fā)生固縮，染色后的細胞熒光比正常細胞明顯增強。而PI是一種死細胞核染料，不能穿透細胞膜，對于具完整細胞膜的正常細胞或凋亡細胞不能染色。但對于壞死細胞，由于膜的完整性喪失，PI能夠穿透進入細胞，與DNA結(jié)合（很大激發(fā)波長為536nm，發(fā)射波長為617nm），呈現(xiàn)紅色熒光。經(jīng)Hoechst 33342/PI雙染后，使用流式細胞儀或熒光顯微鏡檢測，正常細胞為弱紅色熒光+弱藍色熒光；凋亡細胞為弱紅色熒光+強藍色熒光；壞死細胞為強紅色熒光+弱藍色熒光。
本試劑盒可檢測100個樣品，每個樣本的細胞數(shù)量可為0.1~1×06。
產(chǎn)品包裝
編號 | 組分名稱 | 規(guī)格 | 保存方法 |
MX3201-A | Cell Stain Buffer 細胞染色緩沖液（2×） | 100ml | 4℃或-20℃ |
MX3201-B | Hoechst 33342 Stain Hoechst染色液 | 0.5ml | -20℃避光 |
MX3201-C | PI Stain PI染色液 | 0.5ml | -20℃避光 |
注意事項
熒光染料均存在淬滅的問題，建議染色后盡快檢測。
Hoechst 33342孵育細胞時間不宜過長，一般控制在20min內(nèi)。太長容易引起探針的發(fā)射光譜由藍光向紅光遷移，導致紅色熒光與藍色熒光的比例改變。
PI對人體有一定的刺激性，請注意適當防護。
如果要進行組織的凋亡和壞死檢測，請將組織消化制備成單細胞懸液后再檢測。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
注意事項
1）本品不是臨床藥物，只能用于科研用途，不能用于診斷或臨床用途。
2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法
一、細胞樣本制備
1.1 貼壁細胞
1.1.1 小心收集細胞培養(yǎng)液到一個無菌離心管內(nèi)備用；
1.1.2 用yi蛋白酶消化細胞至細胞可以輕輕用移液槍或槍頭吹打下來，加入前面收集的細胞培養(yǎng)液，吹打下所有貼壁細胞，并輕輕吹散細胞
1.1.3 收集上述細胞懸液到離心管內(nèi)，4℃，1000g離心3~5min，使細胞沉至管底，小心吸取上清并丟棄，可留約50μl培養(yǎng)液，以免吸走細胞。【注意】：某些特殊細胞，如果沉淀不充分，可以適當提高離心力或者延長離心時間。
1.1.4 加入約1ml提前預冷的PBS，重懸細胞，并轉(zhuǎn)移到1.5ml無菌離心管，4℃，1000g離心3~5min，使細胞沉至管底。
1.1.5 小心吸取上清并丟棄，可留約50μl PBS，以免吸走細胞。輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞，避免細胞成團。
1.2 懸浮細胞
1.2.1 4℃，1000g離心3~5min，使細胞沉至管底，小心吸取上清并丟棄，可留約50μl培養(yǎng)液，以免吸走細胞。
1.2.2 加入約1ml提前預冷的PBS，重懸細胞，并轉(zhuǎn)移到1.5ml無菌離心管，4℃，1000g離心3~5min，使細胞沉至管底。
1.2.3 小心吸取上清并丟棄，可留約50μl PBS，以免吸走細胞。輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞，避免細胞成團。
二、染色前制備
2.1細胞染色緩沖液（1×）的準備：取適量細胞染色緩沖液（2×）與無菌去離子水或蒸餾水等比例混合，即為細胞染色緩沖液（1×），4℃保存?zhèn)溆谩?/span>
2.2 細胞重懸：將上述收集好的0.1~1×06細胞，加入0.9ml 細胞染色緩沖液（1×），重懸細胞沉淀。
三、Hoechst 33342/PI雙染
3.1 加入5μl Hoechst 33342染色液，置于37℃水浴，孵育5~15min。
3.2 置于冰水冷卻，4℃，1000g離心3~5min，使細胞沉至管底，棄上層染色液。
3.3 加入0.9ml 細胞染色緩沖液（1×），重懸細胞沉淀。
3.4 加入5μl PI染色液，置于冰浴或4℃，孵育20~30min。
【注意】：也可一步法進行染色：加入5μl Hoechst 33342染色液和5μl PI染色液，輕輕混勻，置于冰浴或4℃，孵育20~30min。
四、結(jié)果分析
4.1 流式細胞儀檢測
用流式細胞儀在激發(fā)波長400~500nm處檢測藍色熒光，在＞630nm處檢測紅色熒光，同時檢測光散射情況。采用適當分析軟件進行細胞DNA含量分析和光散射分析。
4.2 熒光顯微鏡檢測
檢測前，4℃，1000g離心3～5min沉淀細胞，用PBS洗滌一次，再涂片觀察紅色和藍色熒光。
【注意】：對于貼壁細胞，也可不收集細胞，棄培養(yǎng)液后直接依次按照上述比例加入細胞染色緩沖液（1×）、Hoechst 33342染色液、PI染色液，置于冰浴或4℃，孵育20～30min。染色后，PBS洗滌一次，再在熒光顯微鏡下觀察。
4.3 結(jié)果呈現(xiàn)
正常細胞呈低藍光/低紅光，凋亡細胞呈高藍光/低紅光；壞死細胞呈低藍光/高紅光。
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貨號 | 名稱 | 規(guī)格 |
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— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務(wù)工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信"的經(jīng)營理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。
細胞凋亡雙染試劑盒
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